Vengono fornite allo studente conoscenze sulle principali tecniche utilizzate nei laboratori di biochimica per la purificazione e la caratterizzazione di molecole biologiche. In particolare il corso è incentrato sull'apprendimento dei principi di base teorico-pratici delle tecniche spettroscopiche, cromatografiche ed elettroforetiche.
Prerequisiti
Conoscenza della chimica e della biochimica di base
Metodi didattici
Lezioni frontali, dove sono utilizzate proiezioni Power Point.
Verifica Apprendimento
Esame orale. L’esame consiste in una prova orale individuale, dove saranno verificate le competenze acquisite relativamente ai contenuti del corso.
Testi
Materiale didattico fornito dal docente
Contenuti
Principi di base: Massa, volume, soluzioni, concentrazione, il pH. Preparazione di soluzioni, tamponi ed uso della strumentazione di base di un laboratorio. Acqua deionizzata e MilliQ. Tecniche spettroscopiche: Principi teorici generali: proprietà della radiazione elettromagnetica, interazione con la materia. Spettroscopia nell’UV e visibile: principi teorici, legge di Lambert-Beer, strumentazione, applicazioni. Spettrofluorimetria, Colorimetria. Tecniche Cromatografiche: Principi generali. Cromatografia a bassa pressione e ad alta pressione (HPLC) Cromatografia a esclusone molecolare (Gel filtrazione) Cromatografia a scambio ionico Cromatografia di affinità Criteri di scelta di un sistema cromatografico. Tecniche Elettroforetiche: Principi generali Materiali di supporto: Agarosio, Poliacrilammide Elettroforesi delle proteine: SDS-PAGE, elettroforesi in condizioni native, Isoelettrofocalizzazione (IEF), Elettroforesi bidimensionale(2-D PAGE) Metodi di colorazione e rivelazione Western blotting Elettroforesi del DNA su gel di agarosio Elettroforesi capillare (cenni)
