502272 - LABORATORIO DI METODOLOGIE CELLULARI

Modulo 1: docente Elena Maria Clotilde Raimondi Colture di cellule di mammifero, tripsinizzazione, conteggio e semina delle cellule, saggi di vitalità e proliferazione, allestimento di preparati cromosomici, immuno-fluorescenza, purificazione e marcatura di sonde di DNA, ibridazione in situ su preparati cromosomici, dimostrazione sperimentale che la replicazione del DNA è semiconservativa (test degli SCE), bandeggio cromosomico, ricostruzione del cariotipo umano, identificazione dei cromosomi coinvolti nelle principali patologie cromosomiche, analisi di microscopia in fluorescenza con telecamere CCD. Modulo 2: docente Sergio Comincini Isolamento ed analisi di vescicole extracellulari. Modificazione del contenuto vescicolare mediante introduzione attraverso tecniche di elettroporazione di molecole fluorescenti e successiva somministrazione delle vescicole modificate a cellule riceventi. Osservazione del processo di internalizzazione cellulare mediante microscopio a fluorescenza. Modulo 3: docente Rossella Tricarico Valutazione funzionale a breve e lungo termine di colture cellulari in adesione, in condizioni fisiologiche e dopo trattamenti o stress: saggio di clonogenicità (sopravvivenza a lungo termine), saggio di senescenza (arresto proliferativo), saggio di proliferazione e saggio di migrazione, con particolare attenzione all’analisi e interpretazione dei dati. Osservazione morfologica su diverse linee cellulari (microscopia in campo chiaro e a fluorescenza); allestimento di preparati cellulari su diversi supporti e in differenti assetti sperimentali, specifici per i vari saggi. Per ciascun saggio: acquisizione di immagini e misure, quantificazione e analisi e interpretazione dei risultati.