Lo studente 1) conoscerà le principali tecniche di biologia molecolare per l’estrazione, amplificazione e analisi degli acidi nucleici 2) conoscerà le principali applicazioni inerenti la diagnostica molecolare e gli aspetti di base della logista diagnostica
Metodi didattici
- Lezioni frontali - Discussione di scenari di laboratorio - Approfondimento individuale tramite letteratura e fonti suggerite
Verifica Apprendimento
Esame scritto
Testi
Tietz textbook of Clinical Chemistry and molecular diagnotics
Ciaccio Lippi - Biochimica Clinica e Medicina di Laboratorio
Contenuti
1. Fondamenti di logica diagnostica 2. Tecniche di estrazione degli acidi nucleici 3. Tecniche di quantificazione degli acidi nucleici 4. Controllo di qualità degli acidi nucleici 5. Tecniche di amplificazione degli acidi nucleici: principi generali, tipologie principali 6. Reazione a catena della polimerasi: principi generali, disegno sperimentale, considerazioni tecniche, principali applicazioni 7. Varianti della PCR: Hot start PCR, Touch down PCR, Nested PCR, Multiplex PCR, Inverse PCR, Direct PCR, GC-rich PCR, Reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR), Quantitative polymerase chain reaction (qPCR), real time qPCR, Reverse transcriptase qPCR (RT-qPCR), digital PCR 8. Tecniche di elettroforesi degli acidi nucleici 9. Analisi dei polimorfismi di lunghezza dei frammenti di restrizione (RFLP) 10. PCR-Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) 11. Analisi ad alta risoluzione della curva di melting 12. Microarrays: chip per single variant nucleotidiche (SNV chips), microarrays per studi di espressione genica, arrays per ibridizzazione genomica comparativa (aCGH) 13. Ibridizzazione In situ: Ibridizzazione in situ con fluorescenza (FISH), cariotipo spettrale (SKY) 14. Sequenziamento mediante reazione di terminazione con dideossinucleotidi (sequenziamento Sanger) 15. Tecniche di sequenziamento parallelo massivo: principi generali 16. Amplificazione a ponte e sequenziamento mediante impiego di terminatori reversibili marcati con composti fluorescenti 17. Sequenziamento real time di single molecule di DNA mediante impiego di nucleotidi fluorescenti 18. Metodologie di arricchimento di regioni target per sequenziamento parallelo massivo 19. Sequenziamento dell’intero esoma (WES) 20. Applicazione della diagnostica molecolare: esempi clinici
Lingua Insegnamento
Italiano
Altre informazioni
Con riferimento al nuovo regolamento di inclusione di studenti in particolari situazioni, il docente fornira' l'assistenza e il materiale didattico necessario alla formazione dello studente in preparazione all'esame.
